Table 2 Optimal conditions for LC analysis of nucleosides

Analytical column

CAPCELL PAK ADME

(100 × 2.1 mm i.d., 3-μm particle size, Shiseido)

Mobile phase

A, 20 mM CH₃COONH₄/H₂O

(Adjusted to pH 5.3 using CH₃COOH)

B, 1.0 M CH₃COONH₄/MeCN/H₂O/CH₃COOH

=1:95:5:0.03 (v/v/v/v)

Analytical gradient

0.0–1.0 min; A/B = 100.0/0.0

1.0–4.0 min; A/B = 100.0/0.0 → 91.4/8.6

4.0–5.0 min; A/B = 91.4/8.6 → 88.6/11.4

5.0–8.0 min; A/B = 88.6/11.4 → 79.9/20.1

8.0–10.0 min; A/B = 79.9/20.1 → 0.0/100.0

Analytical flow rate

0.0–10.0 min; 400 μL/min

Wash gradient

0.0–4.0 min; A/B = 0.0/100.0

4.0–5.0 min; A/B = 0.0/100.0 → 100.0/0.0

5.0–10.0 min; A/B = 100.0/0.0

Wash flow rate

0.0–1.0 min; 400 μL/min → 700 μL/min

1.0–4.0 min: 700 μL/min

4.0–5.0 min; 700 μL/min → 400 μL/min

5.0–10.0 min; 400 μL/min

Post-column addition

MeOH; 400 μL/min

MS divert valve

0.0–0.5 min; waste

0.5–10.0 min; detector

Oven temperature

40 °C

Injection volume

3 μL